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去除融合蛋白標(biāo)簽的選項(xiàng)TEV蛋白酶——看這里

  專題推薦     |      2023-11-08
大家好，我是蛋白工具酶家族的新成員，我的名字叫“重組煙草蝕紋病毒蛋白酶（rTEV Protease）”，今天跟大家做個(gè)自我介紹：
                                       
產(chǎn)品描述    
重組TEV蛋白酶（rTEV Protease）經(jīng)過(guò)基因工程改造，在大腸桿菌中重組表達(dá)，帶His標(biāo)簽(6X His tag)，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強(qiáng)的穩(wěn)定性和特異性。rTEVProtease是一種用來(lái)切除融合蛋白上標(biāo)簽序列的常用工具酶，較EK、SUMO等蛋白酶的位點(diǎn)專一性更強(qiáng)，具有高活性和高特異性的特點(diǎn)。
品牌                        
貨號(hào)                        
包裝規(guī)格                        
比活                        
Seebio?                        
EBY3644A-1KU
酶：1×1KU、Buffer：1×1.5ml
1U/μL
Seebio?                        
EBY3644A-5KU
酶：1×5KU、Buffer：2×1.5ml
5U/μL
Seebio?                        
EBY3644A-10KU
酶：2×5KU、Buffer：4×1.5ml
5U/μL
產(chǎn)品特點(diǎn)    
嚴(yán)格識(shí)別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點(diǎn)在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。其序列專一性遠(yuǎn)比凝血酶、因子xa、腸激酶等蛋白酶高。TEV蛋白酶可在廣泛pH（6.0-8.5）和溫度（4-30℃）內(nèi)進(jìn)行酶切，使得反應(yīng)條件的選擇可根據(jù)目的蛋白的情況而靈活變動(dòng)。rTEV酶在pH 7.0，30℃時(shí)可達(dá)到頂值活性。
產(chǎn)品應(yīng)用    
用于切除重組蛋白的融合標(biāo)簽。rTEV酶的N端含有6×His，酶切結(jié)束后可以通過(guò)Ni2+親和層方便地去除rTEV，以達(dá)到純化目的蛋白的目的。
產(chǎn)品屬性    
來(lái)源（Source）                        
大腸桿菌重組表達(dá)
外觀（Appearance）                        
無(wú)色透明液體
分子量                        
27.8kDa
比活力（Specific Activity）                        
1U/μL1 5U/μL
活性定義（Unit Definition）                        
在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反應(yīng)1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。
純化（Purification）                        
色譜純化
純度（Purity）                        
≥95%（by SDS-PAGE）
產(chǎn)品組成                        
25mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,5mM DTT, 50%(v/v)Glycerol, pH8.0。
表1. 不同溫度下rTEV酶切活性
反應(yīng)時(shí)間（h）
不同溫度下剪切活性（%）
4℃
16℃
21℃
30℃
1
34
58
56
70
2
58
80
78
90
3
71
99
99
99
3.5
84
99
99
99
應(yīng)用舉例    
組分                        
用量                        
融合蛋白
30μg
rTEV Protease (1 U/μL)
10μL
rTEV buffer（10×）
10μL
ddH2O
隨終體積變動(dòng)
1.按如上表格配制反應(yīng)體系。
 2.混勻后在30℃條件下溫育，分別在1h、2h、4h、6h后取樣，置于單獨(dú)的EP管中。
 3.向上述EP管中加入適量的 5×SDS Loading Buffer，-20℃保存至酶切完成。
 4.取酶切樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析，確定酶切效果，調(diào)整所需的合適酶量和反應(yīng)時(shí)間。
 5.如果目的蛋白在30℃不穩(wěn)定，可以于4℃反應(yīng)過(guò)夜(16小時(shí)左右)。
運(yùn)輸與保存    
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期≥2年。
影響天然TEV酶活性的常見因素：    
1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），PestatinA（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），以上這些蛋白酶抑制劑對(duì)rTEV的活性沒(méi)有影響；
2）Zn2+濃度（>5 mM）對(duì)rTEV活性有抑制作用；
3）與半胱氨酸反應(yīng)的試劑，也是rTEV的潛在抑制劑。
常見問(wèn)題    
Q：該產(chǎn)品有何優(yōu)點(diǎn)？
 A：重組型TEV 蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過(guò)基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅有天然 TEV 酶活性，同時(shí)不會(huì)出現(xiàn)天然TEV酶的自我酶解問(wèn)題，在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強(qiáng)的穩(wěn)定性和特異性。
Q：該產(chǎn)品可用于什么實(shí)驗(yàn)？、
 A：rTEV 是一種用來(lái)切除融合蛋白上親和標(biāo)簽的常用工具酶，具有很強(qiáng)的位點(diǎn)特異性。
Q：該產(chǎn)品的最適酶切時(shí)間和溫度是多少？
 A：16-30℃下反應(yīng) 3-3.5h 效果佳。
特別推薦    
Seebio? TEV 蛋白酶（TEV Protease）活性測(cè)定試劑盒（熒光法）
貨號(hào)                        
中文名稱                        
包裝規(guī)格                        
EKM0101B-50T
Seebio? TEV 蛋白酶（TEV Protease）活性測(cè)定試劑盒（熒光法）
50T
相關(guān)產(chǎn)品    
Seebio? 重組蛋白A（rProtein A）    
貨號(hào)                        
中文名稱                        
包裝規(guī)格                        
ECL0019H-10mg
重組蛋白A（rProtein A）-層析填料專用
10mg
ECL0019H-100mg
重組蛋白A（rProtein A）-層析填料專用
100mg
ECL0019H-1g
重組蛋白A（rProtein A）-層析填料專用
1g
ECL0019H-1kg
重組蛋白A（rProtein A）-層析填料專用
1Kg
重組腸激酶    
貨號(hào)                        
中文名稱                        
包裝規(guī)格                        
ECE1123A
重組腸激酶
100U
ECE0616D-1KU
凝血酶
1KU（2000U/mg）
AJL0940C
Seebio? 線性聚乙烯亞胺（PEI 40,000）
10mg

 

大家好，我是蛋白工具酶家族的新成員，我的名字叫“重組煙草蝕紋病毒蛋白酶（rTEV Protease）”，今天跟大家做個(gè)自我介紹：
                   
                   
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比活                        
Seebio?
EBY3644A-1KU
酶：1×1KU、Buffer：1×1.5ml
1U/μL
Seebio?
EBY3644A-5KU
酶：1×5KU、Buffer：2×1.5ml
5U/μL
Seebio?
EBY3644A-10KU
酶：2×5KU、Buffer：4×1.5ml
5U/μL
產(chǎn)品特點(diǎn)    
嚴(yán)格識(shí)別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點(diǎn)在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。其序列專一性遠(yuǎn)比凝血酶、因子xa、腸激酶等蛋白酶高。TEV蛋白酶可在廣泛pH（6.0-8.5）和溫度（4-30℃）內(nèi)進(jìn)行酶切，使得反應(yīng)條件的選擇可根據(jù)目的蛋白的情況而靈活變動(dòng)。rTEV酶在pH 7.0，30℃時(shí)可達(dá)到頂值活性。
產(chǎn)品應(yīng)用    
用于切除重組蛋白的融合標(biāo)簽。rTEV酶的N端含有6×His，酶切結(jié)束后可以通過(guò)Ni2+親和層方便地去除rTEV，以達(dá)到純化目的蛋白的目的。
產(chǎn)品屬性    
來(lái)源（Source）                        
大腸桿菌重組表達(dá)
外觀（Appearance）                        
無(wú)色透明液體
分子量                        
27.8kDa
比活力（Specific Activity）                        
1U/μL1 5U/μL
活性定義（Unit Definition）                        
在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反應(yīng)1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。
純化（Purification）                        
色譜純化
純度（Purity）                        
≥95%（by SDS-PAGE）
產(chǎn)品組成                        
25mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,5mM DTT, 50%(v/v)Glycerol, pH8.0。
表1. 不同溫度下rTEV酶切活性
反應(yīng)時(shí)間（h）
不同溫度下剪切活性（%）
4℃
16℃
21℃
30℃
1
34
58
56
70
2
58
80
78
90
3
71
99
99
99
3.5
84
99
99
99
應(yīng)用舉例    
組分                        
用量                        
融合蛋白
30μg
rTEV Protease (1 U/μL)
10μL
rTEV buffer（10×）
10μL
ddH2O
隨終體積變動(dòng)
1.按如上表格配制反應(yīng)體系。
 2.混勻后在30℃條件下溫育，分別在1h、2h、4h、6h后取樣，置于單獨(dú)的EP管中。
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運(yùn)輸與保存    
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期≥2年。
影響天然TEV酶活性的常見因素：    
1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），PestatinA（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），以上這些蛋白酶抑制劑對(duì)rTEV的活性沒(méi)有影響；
2）Zn2+濃度（>5 mM）對(duì)rTEV活性有抑制作用；
3）與半胱氨酸反應(yīng)的試劑，也是rTEV的潛在抑制劑。
常見問(wèn)題    
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Q：該產(chǎn)品可用于什么實(shí)驗(yàn)？、
 A：rTEV 是一種用來(lái)切除融合蛋白上親和標(biāo)簽的常用工具酶，具有很強(qiáng)的位點(diǎn)特異性。
Q：該產(chǎn)品的最適酶切時(shí)間和溫度是多少？
 A：16-30℃下反應(yīng) 3-3.5h 效果佳。
特別推薦    
Seebio? TEV 蛋白酶（TEV Protease）活性測(cè)定試劑盒（熒光法）
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EKM0101B-50T
Seebio? TEV 蛋白酶（TEV Protease）活性測(cè)定試劑盒（熒光法）
50T
相關(guān)產(chǎn)品    
Seebio? 重組蛋白A（rProtein A）    
貨號(hào)                        
中文名稱                        
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ECL0019H-10mg
重組蛋白A（rProtein A）-層析填料專用
10mg
ECL0019H-100mg
重組蛋白A（rProtein A）-層析填料專用
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重組蛋白A（rProtein A）-層析填料專用
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重組腸激酶    
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ECE1123A
重組腸激酶
100U
ECE0616D-1KU
凝血酶
1KU（2000U/mg）
AJL0940C
Seebio? 線性聚乙烯亞胺（PEI 40,000）
10mg