Seebio?TEV 蛋白酶（TEV Protease）活性測定試劑盒(熒光法)

EKM0101B

TEV蛋白酶（煙草蝕刻病毒蛋白酶）是一種半胱氨酸蛋白酶，識別序列為Glu-X-X-Y-X-Gln-Gly/Ser，裂解位于Gln和Gly/Ser之間。本試劑盒基于TEV蛋白酶的特異性底物肽被切割后形成穩定、高熒光、低背景的熒光產物，通過檢測386nm激發光下，480nm發射光的熒光強度，再利用標準曲線準確定量出TEV蛋白酶的活性。本品可用于檢測樣本中TEV蛋白酶活性或TEV酶殘留量。

1.本試劑盒簡單、快速，適合純品及組織裂解液上清中TEV酶活性的定量檢測；

2.TEV 酶活性的線性檢測范圍為0.1~ 1.0 U/μl；

3.本品具有穩定、高熒光、低背景特征。

請事先準備好無菌離心管、恒溫培養箱或水浴鍋、微量移液器、熒光酶標儀等。

1. 標準品溶液制備：取一支TEV酶標準品，2000~3000rpm離心30s，將液體集中于管底，首孔不加稀釋液，直接取加10μl標準品；后續取4支稀釋管，每管加入25μl的稀釋液后，再取25μl的標準品（1U/μl）加入首支稀釋管中、用移液器反復吹吸混合5次后，取25μl加入下一管，依次做4次倍比稀釋；最后制成1.0、0.5、0.25、0.125和 0.0625 U/μl的5個不同濃度標準品溶液。

2. 樣品準備：將待測樣品中TEV酶的活性濃度調整到0.1 ~ 1.0 U/μl。

3. 底物溶液準備：取一支底物液，輕微離心收液至管底，加入300μl稀釋液，混勻，離心備用。

4. 取黑色96孔反應板，各孔做好標記，并按下表配制反應液（每個檢測樣品設2個復孔）：

5. 檢測流程：

（1）將微孔板置于30℃恒溫孵育30min；

（2）孵育完成后，加入終止液，50μl /孔，混勻；

（3）加入100μl 溶液A，混勻；再加50μl 溶液B，混勻，靜置2min后進行熒光酶標儀檢測；

（4）熒光酶標儀檢測參數為：激發波長386nm，發射波長480nm。

6. 數據分析：

計算各孔凈熒光值（檢測值減去空白對照）和各組平均凈熒光值，繪制標準曲線。根據標準曲線計算獲得樣品活性值。

1.本試劑盒僅供研究使用。

2.打開啟用后，放至2-8℃，建議1-2周內使用完。

3.低溫可致溶液A有結晶析出，用前請溫浴溶解。

4.溶液B每次加取后要迅速旋蓋密封，防止污染。

2-8℃儲存，有效期12個月。

1.獲得測定值，計算平均凈熒光值

2.繪制標準曲線，擬合標準方程式

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3.根據標準方程，計算樣品活性濃度

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