【產品描述】

PNGase F是一種酰胺酶，切割糖蛋白上的N-連接糖，切割的糖型有：高甘露糖、雜合和復雜寡糖，切割位點為：內側的N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間。使得糖蛋白釋放以天冬酰胺連接的糖分子，并使得天冬酰胺轉化為天冬氨酸本公司PNGase是E.coli重組表達，并經多步純化制備的重組蛋白。可以提供不含甘油形式，便于在HPLC方法中取得較佳作用。

【酶活定義】

一個單位是指10μL的反應體系中，37°℃反應1小時從10μg變性RNase B中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。

【組成成分】

【使用方法 僅供參考】

復溶

將裝有 PNGase F 的離心管 100-200g離心 2min，小心開蓋，加入純水，使得終濃度為 500U/ul，上下顛倒盡量混勻，混勻后100-200g 離心 2min。復溶后的 PNGase F長期應儲存于-20℃，盡量避免反復凍融，可儲藏6個月。

變性酶切

1、用去離子水溶解1-20μg糖蛋白，加入1μl 10×變性緩沖液，并用去離子水定溶至10μl。100℃孵育10 min。

轉移至冰上，并離心10s。

2、 加入2μl 10×糖苷酶切緩沖液，2μl 10%NP-40,5μl去離子水，混勻。

3、加入1μl 復溶后的PNGase F，37°℃孵育60 min，進行SDS-PAGE或HPLC分析。

非變性酶切

1、用去離子水溶解1-20μg糖蛋白，加入1μl10×糖苷酶切緩沖液，2-4μl復溶后的 PNGase F，并用去離子水定溶至10μl，

37℃孵育2h-過夜。

2、進行SDS-PAGE或HPLC分析。

【注意事項】

本品復溶后盡量避免反復凍融；

變性酶切的效率較高，應先進行嘗試。如果遇到無法進行變性酶切(例如變性過程中出現沉淀),可嘗試非變性酶切，但酶切效率可能會下降，建議增加酶量并延長酶切時間。

使用時請穿實驗服并佩戴一次性手套；