疫苗生產(chǎn)過程中不可避免的有一些雜質，如細菌菌體、細胞碎片、血清、雜蛋白、核酸等。為了得到具有高純度、無菌性和安全性的疫苗，要除去這些雜質。

傳統(tǒng)疫苗的分離純化方法    

連續(xù)離心、沉淀、過濾或萃取等物理、化學方法。我國采用酸沉淀法生產(chǎn)百日咳滅活疫苗，就是由菌體培養(yǎng)液加甲醛殺菌滅活后，用HCl調pH至3.8~4.4，靜置十幾小時自然沉淀出菌體和可溶性抗原，再離心、洗滌而得。

1 鹽析    

鹽析一般是指溶液中加入無機鹽類而使某種物質溶解度下降而析出的過程。如：加濃(NH4)₂SO₄使蛋白質凝聚的過程。鹽析可以通過各種物質的溶解度的不同進行分離，但是溶解度相同或差異不大很難進行分離。

   

2 酸沉淀    

酸沉淀是指溶液的pH改變，使得溶液中某些物質的溶解度下降，從而凝聚沉淀。過酸容易使得蛋白質變性。

3 超速離心    

蔗糖、CsCl、KBr密度梯度離心。處理樣品量太少、操作復雜、控制較難。

   

采用此技術純化嗜血流感細菌(Haemophilus influenzae)外膜脂蛋白P6，先連續(xù)離心(9000g)收獲菌體超聲破碎，再高速離心(21000g)沉淀出肽聚糖和含有P6的未破碎細胞，然后超速離心(100000g)除去肽聚糖，加壓透析得到目的抗原組分。

現(xiàn)代分離純化技術    

膜過濾、分子篩層析、離子交換層析、親和層析等。

1 膜過濾    

膜過濾是一種與膜孔徑大小相關的篩分過程，以膜兩側的壓力差為驅動力，以膜為過濾介質，在一定的壓力下，當原液流過膜表面時，膜表面密布的許多細小的微孔只允許水及小分子物質通過而成為透過液，而原液中體積大于膜表面微孔徑的物質則被截留在膜的進液側，成為濃縮液，因而實現(xiàn)對原液的分離和濃縮的目的。

   

2 分子篩層析（凝膠過濾層析）    

使用有一定大小孔隙的凝膠作層析介質(如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等)，利用凝膠顆粒對分子量和形狀不同的物質進行分離的層析技術。由于各種分子的大小、形狀不同，擴散到凝膠孔隙內(nèi)的速度不同，因而通過層析柱的快慢不同而分離。

   

3 離子交換層析    

固定相是離子交換劑的層析分離技術。樣品中待分離的溶質離子，與固定相上所結合的離子交換，不同的溶質離子與離子交換劑上離子化的基團的親和力和結合條件不同，洗脫液流過時，樣品中的離子按結合力的弱強先后洗脫。在生物化學和分子生物學領域此法常用于分離蛋白質、核酸等生物大分子。

   

4 親和層析    

利用分子與其配體間特殊的、可逆性的親和結合作用而進行分離的一種層析技術。可以選用生物化學、免疫化學或其他結構上吻合等親和作用而設計的各種層析分離方法。如用寡脫氧胸苷酸-纖維素分離純化信使核糖核酸；用DNA-纖維素分離依賴DNA的DNA聚合酶；用瓊脂糖-抗體制劑分離抗原；用金屬螯合柱分離帶有成串組氨酸標簽的重組蛋白質等。

   

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